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Chromatin immunocoprecipitation
染色质免疫共沉淀技术

实验原理

将ChIP与第二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术,能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段。ChIP-Seq的原理是:首先通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,并对其进行纯化与文库构建;然后对富集得到的DNA片段进行高通量测序。研究人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的DNA区段信息。

图片17-染色质免疫共沉淀技术.png


实验流程

(1)甲醛交联整个细胞系(组织),将目标蛋白与染色质连结起来;

(2)分离基因组DNA,并用超声波将其打断成一定长度的小片段;

(3)添加与目标蛋白质特异的抗体,该抗体与目标蛋白形成免疫沉淀免疫结合复合体;

(4)去交联,纯化DNA即得到染色质免疫沉淀的DNA样本;

(5)将准备好的样本进行深度测序。


结果展示

图片18-染色质免疫共沉淀技术.png

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